細胞凍存是將細胞放在低溫環(huán)境,減少細胞代謝,以便長期儲存的一種技術。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,起到了細胞保種的作用。
細胞凍存技術作為一種保存細胞的有效方法,在生物學領域已有深入廣泛的應用。因為正常情況下,直接冷凍細胞會產生冰晶對細胞造成傷害,從而導致細胞死亡。所以需要通過添加冷凍保護劑配制細胞凍存液,來保護細胞。
常用的細胞凍存液通常為胎牛血清中添加10%二甲基亞砜(DMSO),二甲基亞砜(DMSO),可以減少冰晶的形成,減輕自由基對細胞損害,改變生物膜對電解質、藥物、毒物和代謝產物的通透性,可以很好地在細胞凍存過程中保護細胞。
操作使用:
1、按照常用方法懸浮細胞或貼壁細胞收集于離心管中。
2、1000rpm-1500rpm,5min離心,棄上清液。
3、加入適量的Serum-Free細胞凍存液于離心管中,推薦細胞凍存濃度為 1×106 - 1×107 cells/ml。緩慢混合均勻,制成細胞懸液。
4、將離心管中的細胞混合液分裝于已標示*的冷凍保存管中。
5、直接將凍存細胞放入-80℃冰箱,24h后轉入移至-196℃液氮罐長期冷凍保存。